Détermination qualitative des édulcorants dans le vin par chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométries de masse (CL-SM)
RÉSOLUTION OIV-OENO 636-2021
DETERMINATION QUALITATIVE DES EDULCORANTS DANS LE VIN PAR CHROMATOGRAPHIE EN PHASE LIQUIDE COUPLEE A LA SPECTROMETRIE DE MASSE (CL-SM)
L'ASSEMBLÉE GÉNÉRALE,
VU L'ARTICLE 2, paragraphe 2 b) iv de l'Accord du 3 avril 2001 portant création de l’Organisation internationale de la vigne et du vin,
SUR PROPOSITION de la Sous-commission « Méthodes d’analyse »,
DÉCIDE d’introduire la méthode suivante dans le Recueil des méthodes internationales d’analyse des vins et des moûts :
Détermination qualitative des édulcorants dans le vin par chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse (CL-SM)
Méthode Type IV
1. Domaine d’application
La présente méthode est adaptée pour la détermination de la présence de cinq édulcorants artificiels (aspartame, acésulfame potassium, cyclamate de sodium, saccharine et sucralose), ainsi que de l’édulcorant naturel stévioside, dans les vins blancs, rosés et rouges.
2. Définitions
ESI : ionisation par électronébuliseur
CL : chromatographie en phase liquide
CL-SM : chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse
m/z : rapport masse sur charge
SM : spectrométrie de masse
SM/SM : mode d’acquisition de la spectrométrie de masse mesurant les ions d’un produit
Q-TOF : spectrométrie de masse à analyseur quadripolaire et à temps de vol
RP : phase inverse
TR : temps de rétention
CLUHP : chromatographie en phase liquide ultra-haute performance
3. Principe
Le vin est analysé directement par chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse (système CL-SM). Dans la chromatographie en phase liquide (CL), la séparation est réalisée en utilisant une colonne en phase inversée (RP) et la détection est accomplie par spectrométrie de masse (SM) en fonction du rapport masse sur charge (m/z) des composés. Les données de la SM combinées au temps de rétention (TR) sont utilisées pour l’identification et la quantification des édulcorants.
4. Réactifs et matériel
4.1. Réactifs
4.1.1. Acétonitrile, pureté ≥ 99,95 % (n° CAS : 75-05-8)
4.1.2. Eau purifiée : 18 MΩ·cm, COT ≤ 5 µg/L
4.1.3. Acide formique, pureté ≥ 98,0 % (n° CAS : 64-18-6)
4.1.4. Aspartame, pureté ≥ 99,0 % (n° CAS : 22839-47-0)
4.1.5. Acésulfame K, pureté ≥ 99,9 % (n° CAS : 55589-62-3)
4.1.6. Cyclamate de sodium, pureté ≥ 99,8 % (n° CAS : 139-05-9)
4.1.7. Saccharine, pureté ≥ 99,0 % (n° CAS : 81-07-2)
4.1.8. Sucralose, pureté ≥ 98,0 % (n° CAS : 56038-13-2)
4.1.9. Stévioside, pureté ≥ 95,0 % (n° CAS : 57817-89-7)
4.1.10. Vins représentatifs des matrices de travail et préalablement contrôlés comme étant dépourvus de tout édulcorant, afin d’être utilisés pour la préparation des solutions d’étalonnage et des étalons
4.2. Préparation de la solution (à titre d’exemple)
Les étalons et solutions d’étalonnage sont conservés au réfrigérateur à environ 6 °C. Les solutions d’aspartame sont instables dans les médias acides, et elles doivent donc être fraîchement préparées chaque fois que l’étalon est analysé.
4.2.1. Solutions étalons
Les solutions étalons individuelles à 1 g/L sont par exemple préparées en dissolvant 10,0 mg de chaque édulcorant dans des fioles jaugées de 10 mL, complétées au trait de jauge avec de l’eau (4.1.2) ou une solution d’éthanol à 12 % v/v.
4.2.3. Étalons
Les étalons sont préparés et analysés par CL-SM comme tout autre échantillon (voir point 6).
Les étalons sont préparés dans le vin (4.1.10) en diluant la quantité appropriée de solution étalon (4.2.1) permettant d’obtenir des concentrations de 50 µg/L, 100 µg/L, 500 µg/L et 1000 µg/L de chaque édulcorant.
En cas de nécessité d’une performance accrue de la méthode, il est recommandé de procéder à l’étalonnage avec la même matrice que celle à évaluer.
5. Appareillage
5.1. Filtres seringues : membrane en polypropylène à pores de 0,2 µm, de 25 mm de diamètre
5.2. Verrerie de laboratoire, à savoir fioles volumétriques de classe A
5.3. Balance analytique d’une résolution de ± 0,0001 g
5.4. Micropipettes pour des volumes allant de 5 à 1000 µL
5.5. Instrument de chromatographie en phase liquide à haute performance couplé à un spectromètre de masse
5.5.1. Il est possible d’utiliser des systèmes standards de CLHP et de CLUP en réglant les conditions de la séparation chromatographique en conséquence.
5.5.2. Diverses configurations du système SM sont possibles, tels que quadripôle, piège ionique, temps de vol, ainsi que des systèmes hybrides.
6. Préparation des échantillons
Chaque échantillon de vin est préparé par filtration à l’aide d’un filtre seringue (5.1) avant l'injection.
Les échantillons sont préalablement dégazés si nécessaire, en utilisant par exemple un bain à ultrasons ou un barbotage à l’azote. Si les concentrations ne coïncident pas avec la plage d’étalonnage, les échantillons devraient être dilués.
Il est possible d’obtenir une performance accrue en intégrant des étapes supplémentaires à la préparation des échantillons, telles que la dilution (en fonction de la sensibilité de l’instrument), la purification des échantillons et l’extraction.
7. Mode opératoire
La description suivante, fournie à titre d’exemple, se réfère à un instrument de CLUHP-Q-TOF équipé d’une source d’ESI. Des modifications peuvent devoir être réalisées selon le type d’équipement et les prescriptions du fabricant.
7.1. Analyse CL
- Phase mobile A : eau purifiée (4.1.2) contenant 0,1 % d’acide formique (4.1.3)
- Phase mobile B : acétonitrile (4.1.1) contenant 0,1 % d’acide formique (4.1.3)
- Volume d’injection : 2 µL
- Température de l’échantillonneur : 10 °C
- Colonne : RP C8 2,1 mm x 100 mm, 1,9 µm
- Température du four de la colonne : 30 °C
- Gradient :
|
Temps min |
Débit mL/min |
% A |
% B |
|
0 |
0,4 |
90 |
10 |
|
3 |
0,4 |
60 |
40 |
|
3 |
0,4 |
1 |
99 |
|
4 |
0,4 |
1 |
99 |
|
4 |
0,8 |
1 |
99 |
|
5,5 |
0,8 |
1 |
99 |
|
5,5 |
0,5 |
90 |
10 |
|
9,5 |
0,5 |
90 |
10 |
|
9,5 |
0,4 |
90 |
10 |
|
10 |
0,4 |
90 |
10 |
7.2. Paramètres de la spectrométrie de masse
- ESI : ionisation négative
- Température de la source : 200 °C
- Tension capillaire : 3000 V
-
Mode d’acquisition : dissociation induite par collision en mode large bande (bbCID)
- Cela consiste en une acquisition alternée de spectres en modes balayage intégral et SM-SM (acquisition des ions du précurseur et du produit respectivement)
- Énergie de collision : 30 eV
- Fréquence d'acquisition du spectre : 2,0 Hz
- Débit du gaz sec : 8 L/min
- Pression du nébuliseur : 2,0 x 105 Pa (2,0 bar)
8. Identification
L’identification des édulcorants est confirmée en utilisant un étalon pour chaque composé (4.1.4, 4.1.5, 4.1.6, 4.1.7, 4.1.8 et 4.1.9). Les données orientatives récoltées pour la confirmation du pic sont le temps de rétention TR (pouvant varier en fonction des paramètres chromatographiques) et la m/z des ions du précurseur et du produit (Tableau 1).
Tableau 1. Données d’identification des édulcorants : TR, m/z du précurseur et m/z du produit
|
Édulcorant |
TR min |
Ion |
m/z du précurseur |
m/z du produit |
|
Acésulfame K |
1,24 |
[M]- |
161,9867 |
77,9655 |
|
Aspartame |
2,30 |
[M-H]- |
293,1143 |
261,0881 |
|
Cyclamate Na |
1,66 |
[M]- |
178,0543 |
79,9574 |
|
Saccharine |
1,55 |
[M-H]- |
181,9917 |
41,9985 |
|
Sucralose |
2,14 |
[M-H]- |
395,0073 |
359,0306 |
|
Stévioside |
3,63 |
[M-H]- |
803,3707 |
641,3026 |
Note : Les ions utilisés pour la quantification sont soulignés dans le Tableau 1.
Les signaux ioniques sont suivis avec les chromatogrammes des ions extraits avec une tolérance de ±3 mDa (Figure 1).
Figure 1. Confirmation des pics du précurseur et du produit pour un étalon à 250 µg/L
|
Aspartame [M-H]- |
Acésulfame K [M]- |
Cyclamate Na [M]- |
 |
 |
 |
|
Saccharine [M-H]- |
Stévioside [M-H]- |
Sucralose [M-H]- |
 |
 |
 |
Remarque : Un exemple de sensibilité pour un étalon de faible concentration et d’autres transitions sont fournis en annexe.
9. Calculs
Les résultats sont calculés à partir de la courbe d’étalonnage obtenue avec la quantité (µg/L) fonction de l’aire du pic de chaque édulcorant :
 |
où
est la concentration de l’édulcorant (µg/L), 
l’aire du pic de l’échantillon, 
l’ordonnée à l’origine de la courbe d’étalonnage et 
la pente de la courbe d’étalonnage.
10. Résultats
Les concentrations sont exprimées en µg/L, sans décimales.
11. Validation interne
11.1. Matrices
La validation a été réalisée en utilisant un total de 43 vins différents : 20 vins rouges, 10 vins rosés et 13 vins blancs. Ces vins ont été choisis à partir de plusieurs régions, de manière à obtenir une grande variabilité au niveau des caractéristiques, permettant une approche exhaustive. Les principales caractéristiques des vins sont résumées dans le tableau ci-après.
Tableau 2. Principales caractéristiques des matrices
|
Vins rouges (R) |
Vins rosés (Ro) |
Vins blancs (W) |
||||
|
Régions |
Alentejo |
4 |
Douro |
3 |
Açores |
1 |
|
Bairrada |
1 |
Vinho Verde |
1 |
Alentejo |
2 |
|
|
Dão |
3 |
Autre(1) |
6 |
Dão |
1 |
|
|
Douro |
4 |
Douro |
1 |
|||
|
Lisboa |
1 |
Lisboa |
1 |
|||
|
Valladolid |
1 |
Vinho Verde |
4 |
|||
|
Autre(1) |
6 |
Autre(1) |
3 |
|||
|
Titre alcoométrique volumique % v/v |
12,1-17,2 |
9,8-12,6 |
8,7-13,6 |
|||
|
Teneur en sucres g/L (glucose + fructose) |
0,5-108,0 |
0,7-28,8 |
0,2-17,1 |
|||
|
Acidité totale g/L (acide tartrique) |
4,6-6,4 |
4,7-6,0 |
5,2-7,1 |
|||
|
pH |
3,5-3,8 |
3,2-3,5 |
3,2-3,4 |
|||
|
Intensité |
2,4-16,2 |
0,1-0,5 |
0,03-0,29(2) |
|||
(1) Sans indication géographique
(2) Absorbance à 420 nm au lieu de l’intensité
12. Linéarité
La méthode s’est révélée linéaire dans une plage de concentration située entre 50 µg/L et 1000 µg/L.
12.1. Étalonnage
Au total, 14 étalonnages indépendants ont été réalisés, avec 6 vins rouges, 4 vins rosés et 4 vins blancs. Trois approches différentes ont été envisagées pour chaque composé en considérant :
- un étalonnage unifié pour toutes les matrices,
- deux groupes de matrices comptant un groupe pour les vins blancs et un deuxième pour les autres vins (vins rouges et vins rosés),
- trois groupes de matrices comptant des vins blancs, des vins rosés et des vins rouges.
Les résultats optimisés de l’étude de validation sont présentés ci-après. Conditions d’étalonnage choisies : pour l’acésulfame, la saccharine et le sucralose, les fonctions d’étalonnage et les calculs postérieurs ont été réalisés en considérant un groupe pour les vins blancs et un deuxième groupe pour les autres matrices (vins rouges et vins rosés) ; pour l’aspartame, le cyclamate et le stévioside, trois groupes de matrices ont été considérés (vins rouges, vins rosés et vins blancs).
Tableau 3. Schéma d’étalonnage pour chacun des composés
|
Étalonnages |
Individuel |
Combiné |
||
|
Matrices |
Vins blancs |
Vins rosés |
Vins rouges |
Vins rouges + vins rosés |
|
Acésulfame |
X |
X |
||
|
Aspartame |
X |
X |
X |
|
|
Cyclamate |
X |
X |
X |
|
|
Saccharine |
X |
X |
||
|
Stévioside |
X |
X |
X |
|
|
Sucralose |
X |
X |
||
Compte tenu de l’hétéroscédasticité et de la distribution normale des résidus, les moindres carrés pondérés ont été employés comme modèle de régression. À titre d’exemple, le cas du sucralose pour le groupe des vins rouges et des vins rosés dans une plage de concentration de 50 µg/L à 1000 µg/L est présenté ci-après
Figure 2. Courbe d’étalonnage, résidus standardisés et diagramme Q-Q pour l’étalonnage combiné vins rouges + vins rosés pour le sucralose
 |
 |
 |
|
jaune |
2× écart type |
|
rouge |
3× écart type |
12.2. Limites de détection et limites de quantification
Les limites de quantification ont été calculées à partir des courbes d’étalonnage.
Tableau 4. LD et LQ obtenues pour chaque composé
|
LD (mg/L) |
LQ (mg/L) |
|||||
|
Vins blancs |
Vins rosés |
Vins rouges |
Vins blancs |
Vins rosés |
Vins rouges |
|
|
Acesulfame K |
0,003 |
0,003 |
0,011 |
0,011 |
||
|
Aspartame |
0,004 |
0,006 |
0,004 |
0,014 |
0.019 |
0.014 |
|
Cyclamate Na |
0,002 |
0,005 |
0,004 |
0,006 |
0.015 |
0.014 |
|
Saccharin |
0,002 |
0,005 |
0,006 |
0,016 |
||
|
Stevioside |
0,002 |
0,002 |
0,005 |
0,005 |
0.005 |
0.016 |
|
Sucralose |
0,014 |
0,007 |
0,048 |
0,022 |
||
12.3. Répétabilité
La répétabilité a été évaluée à trois niveaux de fortification : 50 µg/L, correspondant à la limite de notification, 250 µg/L et 1000 µg/L. Cette évaluation est basée sur huit répétitions d’injection à chaque niveau de fortification et pour chaque matrice.
Les tableaux ci-après présentent les valeurs de répétabilité obtenues pour chaque édulcorant, comprenant la concentration moyenne mesurée dans chaque échantillon, l’écart type (ET), l’écart type relatif (RSDr%) et la valeur HorRat de répétabilité [HorRat (r)].
Tableau 5. Valeurs de répétabilité pour l’acésulfame potassium aux trois niveaux de fortification
|
Acésulfame |
Vins blancs (W) |
||||||||
|
Échantillon |
W1 |
W2 |
W3 |
W4 |
W5 |
W6 |
W7 |
W8 |
W9 |
|
Moyenne µg/L |
45 |
42 |
49 |
233 |
207 |
240 |
1036 |
926 |
1060 |
|
Écart type |
1,4 |
2,1 |
0,8 |
3,3 |
5,2 |
2,6 |
13,2 |
13,7 |
15,8 |
|
Recouvrement % |
89 % |
84 % |
98 % |
93 % |
83 % |
96 % |
104 % |
93 % |
106 % |
|
RSDr % |
3,2 % |
5,0 % |
1,6 % |
1,4 % |
2,5 % |
1,1 % |
1,3 % |
1,5 % |
1,5 % |
|
HorRat (r) |
0,13 |
0,20 |
0,06 |
0,07 |
0,13 |
0,05 |
0,08 |
0,09 |
0,09 |
|
Acésulfame |
Vins rosés (Ro) |
||||||||
|
Échantillon |
Ro1 |
Ro2 |
Ro3 |
Ro4 |
Ro5 |
Ro6 |
Ro7 |
Ro8 |
Ro9 |
|
Moyenne µg/L |
49 |
52 |
53 |
248 |
248 |
247 |
1063 |
1091 |
1097 |
|
Écart type |
2,0 |
1,2 |
1,4 |
2,9 |
3,5 |
3,9 |
14,1 |
13,2 |
15,5 |
|
Recouvrement % |
98 % |
104 % |
107 % |
99 % |
99 % |
99 % |
106 % |
109 % |
110 % |
|
RSDr % |
4,1 % |
2,3 % |
2,6 % |
1,2 % |
1,4 % |
1,6 % |
1,3 % |
1,2 % |
1,4 % |
|
HorRat (r) |
0,17 |
0,09 |
0,10 |
0,06 |
0,07 |
0,08 |
0,08 |
0,08 |
0,09 |
|
Acésulfame |
Vins rouges (R) |
||||||||
|
Échantillon |
R1 |
R2 |
R3 |
R4 |
R5 |
R6 |
R7 |
R8 |
R9 |
|
Moyenne µg/L |
56 |
50 |
57 |
275 |
241 |
260 |
1195 |
1064 |
1160 |
|
Écart type |
1,2 |
2,0 |
1,4 |
3,2 |
5,1 |
4,3 |
13,8 |
14,5 |
10,0 |
|
Recouvrement % |
112 % |
101 % |
115 % |
110 % |
96 % |
104 % |
120 % |
106 % |
116 % |
|
RSDr % |
2,1 % |
3,9 % |
2,4 % |
1,2 % |
2,1 % |
1,6 % |
1,2 % |
1,4 % |
0,9 % |
|
HorRat (r) |
0,08 |
0,16 |
0,10 |
0,06 |
0,11 |
0,08 |
0,07 |
0,09 |
0,05 |
Tableau 6. Valeurs de répétabilité pour l’aspartame aux trois niveaux de fortification
|
Aspartame |
Vins blancs (W) |
||||||||
|
Échantillon |
W1 |
W2 |
W3 |
W4 |
W5 |
W6 |
W7 |
W8 |
W9 |
|
Moyenne µg/L |
34 |
51 |
45 |
237 |
231 |
235 |
981 |
973 |
982 |
|
Écart type |
7,3 |
4,2 |
6,7 |
27,5 |
7,6 |
10,9 |
29,0 |
18,0 |
23,2 |
|
Recouvrement % |
68 % |
101 % |
91 % |
95 % |
92 % |
94 % |
98 % |
97 % |
98 % |
|
RSDr % |
21,6 % |
8,3 % |
14,7 % |
11,6 % |
3,3 % |
4,6 % |
3,0 % |
1,8 % |
2,4 % |
|
HorRat (r) |
0,87 |
0,33 |
0,59 |
0,59 |
0,17 |
0,24 |
0,19 |
0,12 |
0,15 |
|
Aspartame |
Vins rosés (Ro) |
||||||||
|
Échantillon |
Ro1 |
Ro2 |
Ro3 |
Ro4 |
Ro5 |
Ro6 |
Ro7 |
Ro8 |
Ro9 |
|
Moyenne µg/L |
38 |
42 |
41 |
200 |
211 |
210 |
833 |
905 |
916 |
|
Écart type |
3,0 |
2,9 |
4,3 |
6,8 |
5,2 |
5,9 |
20,9 |
34,0 |
22,5 |
|
Recouvrement % |
75 % |
85 % |
82 % |
80 % |
84 % |
84 % |
83 % |
90 % |
92 % |
|
RSDr % |
8,0 % |
6,9 % |
10,6 % |
3,4 % |
2,5 % |
2,8 % |
2,5 % |
3,8 % |
2,5 % |
|
HorRat (r) |
0,32 |
0,28 |
0,43 |
0,17 |
0,13 |
0,14 |
0,16 |
0,24 |
0,15 |
|
Aspartame |
Vins rouges (R) |
||||||||
|
Échantillon |
R1 |
R2 |
R3 |
R4 |
R5 |
R6 |
R7 |
R8 |
R9 |
|
Moyenne µg/L |
46 |
51 |
50 |
227 |
254 |
230 |
956 |
1099 |
1013 |
|
Écart type |
8,6 |
3,2 |
8,1 |
16,9 |
10,4 |
7,3 |
21,8 |
39,0 |
20,2 |
|
Recouvrement % |
92 % |
103 % |
100 % |
91 % |
102 % |
92 % |
96 % |
110 % |
101 % |
|
RSDr % |
18,5 % |
6,3 % |
16,2 % |
7,4 % |
4,1 % |
3,2 % |
2,3 % |
3,5 % |
2,0 % |
|
HorRat (r) |
0,74 |
0,25 |
0,65 |
0,38 |
0,21 |
0,16 |
0,14 |
0,22 |
0,13 |
Tableau 7. Valeurs de répétabilité pour le cyclamate de sodium aux trois niveaux de fortification
|
Cyclamate |
Vins blancs (W) |
||||||||
|
Échantillon |
W1 |
W2 |
W3 |
W4 |
W5 |
W6 |
W7 |
W8 |
W9 |
|
Moyenne µg/L |
51 |
50 |
50 |
261 |
247 |
246 |
1092 |
1040 |
1045 |
|
Écart type |
1,0 |
1,4 |
1,4 |
2,8 |
4,2 |
3,5 |
12,2 |
17,7 |
14,4 |
|
Recouvrement % |
103 % |
100 % |
101 % |
104 % |
99 % |
99 % |
109 % |
104 % |
105 % |
|
RSDr % |
1,9 % |
2,9 % |
2,9 % |
1,1 % |
1,7 % |
1,4 % |
1,1 % |
1,7 % |
1,4 % |
|
HorRat (r) |
0,08 |
0,12 |
0,11 |
0,05 |
0,09 |
0,07 |
0,07 |
0,11 |
0,09 |
|
Cyclamate |
Vins rosés (Ro) |
||||||||
|
Échantillon |
Ro1 |
Ro2 |
Ro3 |
Ro4 |
Ro5 |
Ro6 |
Ro7 |
Ro8 |
Ro9 |
|
Moyenne µg/L |
42 |
42 |
44 |
232 |
228 |
233 |
982 |
992 |
1002 |
|
Écart type |
1,6 |
1,3 |
0,8 |
2,8 |
4,4 |
4,5 |
14,9 |
6,0 |
12,9 |
|
Recouvrement % |
84 % |
85 % |
88 % |
93 % |
91 % |
93 % |
98 % |
99 % |
100 % |
|
RSDr % |
3,9 % |
3,0 % |
1,7 % |
1,2 % |
2,0 % |
1,9 % |
1,5 % |
0,6 % |
1,3 % |
|
HorRat (r) |
0,16 |
0,12 |
0,07 |
0,06 |
0,10 |
0,10 |
0,10 |
0,04 |
0,08 |
|
Cyclamate |
Vins rouges (R) |
||||||||
|
Échantillon |
R1 |
R2 |
R3 |
R4 |
R5 |
R6 |
R7 |
R8 |
R9 |
|
Moyenne µg/L |
51 |
55 |
54 |
250 |
265 |
243 |
1069 |
1160 |
1086 |
|
Écart type |
1,2 |
1,3 |
1,4 |
5,5 |
5,2 |
4,2 |
27,4 |
13,9 |
18,4 |
|
Recouvrement % |
103 % |
110 % |
108 % |
100 % |
106 % |
97 % |
107 % |
116 % |
109 % |
|
RSDr % |
2,4 % |
2,4 % |
2,6 % |
2,2 % |
2,0 % |
1,7 % |
2,6 % |
1,2 % |
1,7 % |
|
HorRat (r) |
0,10 |
0,10 |
0,10 |
0,11 |
0,10 |
0,09 |
0,16 |
0,08 |
0,11 |
Tableau 8. Valeurs de répétabilité pour la saccharine aux trois niveaux de fortification
|
Saccharine |
Vins blancs (W) |
||||||||
|
Échantillon |
W1 |
W2 |
W3 |
W4 |
W5 |
W6 |
W7 |
W8 |
W9 |
|
Moyenne µg/L |
45 |
45 |
59 |
216 |
214 |
252 |
920 |
909 |
1055 |
|
Écart type |
1,5 |
1,4 |
1,4 |
5,1 |
5,1 |
3,7 |
21,3 |
23,7 |
21,5 |
|
Recouvrement % |
89 % |
91 % |
119 % |
86 % |
86 % |
101 % |
92 % |
91 % |
105 % |
|
RSDr % |
3,3 % |
3,0 % |
2,4 % |
2,4 % |
2,4 % |
1,5 % |
2,3 % |
2,6 % |
2,0 % |
|
HorRat (r) |
0,13 |
0,12 |
0,10 |
0,12 |
0,12 |
0,08 |
0,15 |
0,16 |
0,13 |
|
Saccharine |
Vins rosés (Ro) |
||||||||
|
Échantillon |
Ro1 |
Ro2 |
Ro3 |
Ro4 |
Ro5 |
Ro6 |
Ro7 |
Ro8 |
Ro9 |
|
Moyenne µg/L |
58 |
56 |
56 |
303 |
276 |
278 |
1263 |
1190 |
1204 |
|
Écart type |
1,4 |
2,0 |
0,6 |
5,5 |
3,5 |
4,8 |
28,8 |
24,8 |
25,2 |
|
Recouvrement % |
116 % |
112 % |
112 % |
121 % |
110 % |
111 % |
126 % |
119 % |
120 % |
|
RSDr % |
2,4 % |
3,5 % |
1,1 % |
1,8 % |
1,3 % |
1,7 % |
2,3 % |
2,1 % |
2,1 % |
|
HorRat (r) |
0,10 |
0,14 |
0,04 |
0,09 |
0,07 |
0,09 |
0,14 |
0,13 |
0,13 |
|
Saccharine |
Vins rouges (R) |
||||||||
|
Échantillon |
R1 |
R2 |
R3 |
R4 |
R5 |
R6 |
R7 |
R8 |
R9 |
|
Moyenne µg/L |
47 |
44 |
46 |
224 |
203 |
199 |
955 |
906 |
885 |
|
Écart type |
1,4 |
0,5 |
1,5 |
4,4 |
2,2 |
2,9 |
20,6 |
20,1 |
25,8 |
|
Recouvrement % |
94 % |
88 % |
92 % |
89 % |
81 % |
80 % |
95 % |
91 % |
88 % |
|
RSDr % |
3,0 % |
1,1 % |
3,2 % |
2,0 % |
1,1 % |
1,5 % |
2,2 % |
2,2 % |
2,9 % |
|
HorRat (r) |
0,12 |
0,04 |
0,13 |
0,10 |
0,06 |
0,07 |
0,14 |
0,14 |
0,18 |
Tableau 9. Valeurs de répétabilité pour le stévioside aux trois niveaux de fortification
|
Stévioside |
Vins blancs (W) |
||||||||
|
Échantillon |
W1 |
W2 |
W3 |
W4 |
W5 |
W6 |
W7 |
W8 |
W9 |
|
Moyenne µg/L |
41 |
43 |
30 |
262 |
265 |
204 |
1094 |
1116 |
860 |
|
Écart type |
0,4 |
0,4 |
0,7 |
2,0 |
31,2 |
1,9 |
13,6 |
12,9 |
6,6 |
|
Recouvrement % |
83 % |
86 % |
60 % |
105 % |
106 % |
81 % |
109 % |
112 % |
86 % |
|
RSDr % |
1,0 % |
1,0 % |
2,2 % |
0,8 % |
11,8 % |
0,9 % |
1,2 % |
1,2 % |
0,8 % |
|
HorRat (r) |
0,04 |
0,04 |
0,09 |
0,04 |
0,60 |
0,05 |
0,08 |
0,07 |
0,05 |
|
Stévioside |
Vins rosés (Ro) |
||||||||
|
Échantillon |
Ro1 |
Ro2 |
Ro3 |
Ro4 |
Ro5 |
Ro6 |
Ro7 |
Ro8 |
Ro9 |
|
Moyenne µg/L |
50 |
39 |
41 |
237 |
254 |
286 |
935 |
1104 |
1109 |
|
Écart type |
0,8 |
1,3 |
0,9 |
2,6 |
5,3 |
7,1 |
10,5 |
10,2 |
18,3 |
|
Recouvrement % |
99 % |
77 % |
81 % |
95 % |
102 % |
114 % |
93 % |
110 % |
111 % |
|
RSDr % |
1,7 % |
3,4 % |
2,2 % |
1,1 % |
2,1 % |
2,5 % |
1,1 % |
0,9 % |
1,6 % |
|
HorRat (r) |
0,07 |
0,14 |
0,09 |
0,06 |
0,11 |
0,13 |
0,07 |
0,06 |
0,10 |
|
Stévioside |
Vins rouges (R) |
||||||||
|
Échantillon |
R1 |
R2 |
R3 |
R4 |
R5 |
R6 |
R7 |
R8 |
R9 |
|
Moyenne µg/L |
60 |
40 |
43 |
262 |
211 |
210 |
1048 |
904 |
921 |
|
Écart type |
0,9 |
0,7 |
0,4 |
4,0 |
4,0 |
2,6 |
18,0 |
18,4 |
11,9 |
|
Recouvrement % |
120 % |
80 % |
86 % |
105 % |
85 % |
84 % |
105 % |
90 % |
92 % |
|
RSDr % |
1,5 % |
1,8 % |
1,0 % |
1,5 % |
1,9 % |
1,3 % |
1,7 % |
2,0 % |
1,3 % |
|
HorRat (r) |
0,06 |
0,07 |
0,04 |
0,08 |
0,10 |
0,06 |
0,11 |
0,13 |
0,08 |
Tableau 10. Valeurs de répétabilité pour le sucralose aux trois niveaux de fortification
|
Sucralose |
Vins blancs (W) |
||||||||||
|
Échantillon |
W1 |
W2 |
W3 |
W4 |
W5 |
W6 |
W7 |
W8 |
W9 |
||
|
Moyenne µg/L |
53 |
52 |
53 |
221 |
225 |
223 |
986 |
973 |
1021 |
||
|
Écart type |
5,3 |
7,8 |
8,1 |
10,8 |
27,5 |
6,5 |
29,8 |
43,9 |
31,5 |
||
|
Recouvrement % |
106 % |
103 % |
105 % |
88 % |
90 % |
89 % |
99 % |
97 % |
102 % |
||
|
RSDr % |
10,0 % |
15,1 % |
15,4 % |
4,9 % |
12,2 % |
2,9 % |
3,0 % |
4,5 % |
3,1 % |
||
|
HorRat (r) |
0,40 |
0,61 |
0,62 |
0,25 |
0,63 |
0,15 |
0,19 |
0,28 |
0,19 |
||
|
Sucralose |
Vins rosés (Ro) |
||||||||||
|
Échantillon |
Ro1 |
Ro2 |
Ro3 |
Ro4 |
Ro5 |
Ro6 |
Ro7 |
Ro8 |
Ro9 |
||
|
Moyenne µg/L |
35 |
43 |
36 |
215 |
236 |
194 |
944 |
1075 |
905 |
||
|
Écart type |
4,1 |
2,1 |
2,2 |
7,2 |
7,4 |
7,7 |
21,3 |
27,5 |
19,3 |
||
|
Recouvrement % |
70 % |
86 % |
71 % |
86 % |
94 % |
78 % |
94 % |
108 % |
91 % |
||
|
RSDr % |
11,7 % |
5,0 % |
6,2 % |
3,3 % |
3,1 % |
4,0 % |
2,3 % |
2,6 % |
2,1 % |
||
|
HorRat (r) |
0,47 |
0,20 |
0,25 |
0,17 |
0,16 |
0,20 |
0,14 |
0,16 |
0,13 |
||
|
Sucralose |
Vins rouges (R) |
||||||||
|
Échantillon |
R1 |
R2 |
R3 |
R4 |
R5 |
R6 |
R7 |
R8 |
R9 |
|
Moyenne µg/L |
50 |
46 |
48 |
236 |
255 |
228 |
1017 |
1194 |
1041 |
|
Écart type |
7,7 |
3,1 |
6,8 |
11,5 |
9,2 |
8,4 |
16,9 |
27,5 |
23,0 |
|
Recouvrement % |
100 % |
92 % |
96 % |
94 % |
102 % |
91 % |
102 % |
119 % |
104 % |
|
RSDr % |
15,3 % |
6,9 % |
14,1 % |
4,9 % |
3,6 % |
3,7 % |
1,7 % |
2,3 % |
2,2 % |
|
HorRat (r) |
0,61 |
0,28 |
0,57 |
0,25 |
0,18 |
0,19 |
0,10 |
0,15 |
0,14 |
Tableau 11. Tableau récapitulatif pour la répétabilité
|
Composé |
Recouvrement |
RSDr % |
HorRat (r) |
|
Acésulfame |
83 %-120 % |
0,9 %-5,0 % |
0,05-0,20 |
|
Aspartame |
68 %-110 % |
1,8 %-21,6 % |
0,12-0,87 |
|
Cyclamate |
84 %-116 % |
0,6 %-3,9 % |
0,04-0,16 |
|
Saccharine |
80 %-126 % |
1,1 %-3,5 % |
0,04-0,18 |
|
Stévioside |
60 %-112 % |
0,8 %-11,8 % |
0,04-0,60 |
|
Sucralose |
70 %-119 % |
1,7 %-15,4 % |
0,10-0,63 |
12.4. Fidélité intermédiaire
La fidélité intermédiaire (FI) a été évaluée en analysant des échantillons fortifiés avec 50 µg/L, 250 µg/L et 1000 µg/L à différents moments étalés sur plusieurs jours. Les résultats sont présentés dans le tableau ci-après. Le recompte représente le nombre de points à considérer pour déterminer les valeurs moyennes et l’écart type correspondant (ET). Le pourcentage de recouvrement, l’écart type relatif (RSD%) et la valeur HorRat sont également indiqués pour chaque cas.
Tableau 12. Valeurs de fidélité intermédiaire pour l’acésulfame potassium aux trois niveaux de fortification
|
Acésulfame |
Vins blancs (W) |
Vins rouges (R) et vins rosés (Ro) |
|||||||
|
Échantillon |
W1 |
W2 |
W3 |
Ro1 |
Ro2 |
Ro3 |
R1 |
R2 |
R3 |
|
Recompte |
12 |
12 |
11 |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
Moy. µg/L |
46 |
223 |
928 |
54 |
252 |
1089 |
53 |
252 |
1113 |
|
Écart type |
6,1 |
31,4 |
76,6 |
6,1 |
23,6 |
66,3 |
2,4 |
9,1 |
41,3 |
|
Recouvr.% |
91 % |
89 % |
93 % |
108 % |
101 % |
109 % |
106 % |
101 % |
111 % |
|
RSD% FI |
13,2 % |
14,1 % |
8,2 % |
11,3 % |
9,4 % |
6,1 % |
4,5 % |
3,6 % |
3,7 % |
|
HorRat |
0,53 |
0,72 |
0,52 |
0,46 |
0,48 |
0,38 |
0,18 |
0,18 |
0,23 |
Tableau 13. Valeurs de fidélité intermédiaire pour l’aspartame aux trois niveaux de fortification
|
Aspartame |
Vins blancs (W) |
Vins rosés (Ro) |
Vins rouges (R) |
||||||
|
Échantillon |
W1 |
W2 |
W3 |
Ro1 |
Ro2 |
Ro3 |
R1 |
R2 |
R3 |
|
Recompte |
11 |
10 |
10 |
11 |
12 |
12 |
11 |
12 |
12 |
|
Moy. µg/L |
57 |
281 |
1190 |
41 |
202 |
841 |
41 |
222 |
998 |
|
Écart type |
5,5 |
21,8 |
91,9 |
4,1 |
12,9 |
73,9 |
7,5 |
15,4 |
43,5 |
|
Recouvr.% |
114 % |
113 % |
119 % |
82 % |
81 % |
84 % |
83 % |
89 % |
100 % |
|
RSD% FI |
9,6 % |
7,7 % |
7,7 % |
10,0 % |
6,4 % |
8,8 % |
18,1 % |
6,9 % |
4,4 % |
|
HorRat |
0,38 |
0,40 |
0,49 |
0,40 |
0,32 |
0,55 |
0,73 |
0,36 |
0,27 |
Tableau 14. Valeurs de fidélité intermédiaire pour le cyclamate de sodium aux trois niveaux de fortification
|
Cyclamate |
Vins blancs (W) |
Vins rosés (Ro) |
Vins rouges (R) |
||||||
|
Échantillon |
W1 |
W2 |
W3 |
Ro1 |
Ro2 |
Ro3 |
R1 |
R2 |
R3 |
|
Recompte |
10 |
10 |
10 |
11 |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
Moy. µg/L |
48 |
237 |
1011 |
40 |
210 |
918 |
49 |
226 |
999 |
|
Écart type |
5,5 |
27,3 |
134,3 |
2,5 |
20,1 |
70,7 |
1,3 |
7,4 |
26,6 |
|
Recouvr.% |
97 % |
95 % |
101 % |
80 % |
84 % |
92 % |
98 % |
91 % |
100 % |
|
RSD% FI |
11,3 % |
11,5 % |
13,3 % |
6,3 % |
9,6 % |
7,7 % |
2,7 % |
3,3 % |
2,7 % |
|
HorRat |
0,45 |
0,59 |
0,84 |
0,25 |
0,49 |
0,48 |
0,11 |
0,17 |
0,17 |
Tableau 15. Valeurs de fidélité intermédiaire pour la saccharine aux trois niveaux de fortification
|
Saccharine |
Vins blancs (W) |
Vins rouges (R) et vins rosés (Ro) |
|||||||
|
Échantillon |
W1 |
W2 |
W3 |
Ro1 |
Ro2 |
Ro3 |
R1 |
R2 |
R3 |
|
Recompte |
11 |
10 |
10 |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
Moy. µg/L |
51 |
241 |
1010 |
56 |
270 |
1166 |
44 |
195 |
857 |
|
Écart type |
2,6 |
8,4 |
36,8 |
2,8 |
10,7 |
47,6 |
3,0 |
8,3 |
31,7 |
|
Recouvr.% |
103 % |
96 % |
101 % |
112 % |
108 % |
117 % |
88 % |
78 % |
86 % |
|
RSD% FI |
5,0 % |
3,5 % |
3,6 % |
5,1 % |
4,0 % |
4,1 % |
6,9 % |
4,3 % |
3,7 % |
|
HorRat |
0,20 |
0,18 |
0,23 |
0,20 |
0,20 |
0,26 |
0,28 |
0,22 |
0,23 |
Tableau 16. Valeurs de fidélité intermédiaire pour le stévioside aux trois niveaux de fortification
|
Stévioside |
Vins blancs (W) |
Vins rosés (Ro) |
Vins rouges (R) |
||||||
|
Échantillon |
W1 |
W2 |
W3 |
Ro1 |
Ro2 |
Ro3 |
R1 |
R2 |
R3 |
|
Recompte |
11 |
10 |
10 |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
Moy. µg/L |
35 |
232 |
977 |
31 |
210 |
921 |
41 |
208 |
905 |
|
Écart type |
6,5 |
45,8 |
184,1 |
8,1 |
45,4 |
184,4 |
3,1 |
22,2 |
84,5 |
|
Recouvr.% |
70 % |
93 % |
98 % |
61 % |
84 % |
92 % |
81 % |
83 % |
91 % |
|
RSD% FI |
18,5 % |
19,7 % |
18,8 % |
26,4 % |
21,6 % |
20,0 % |
7,6 % |
10,7 % |
9,3 % |
|
HorRat |
0,74 |
1,01 |
1,19 |
1,06 |
1,10 |
1,26 |
0,31 |
0,55 |
0,59 |
Tableau 17. Valeurs de fidélité intermédiaire pour le sucralose aux trois niveaux de fortification
|
Sucralose |
Vins blancs (W) |
Vins rouges (R) et vins rosés (Ro) |
|||||||
|
Échantillon |
W1 |
W2 |
W3 |
Ro1 |
Ro2 |
Ro3 |
R1 |
R2 |
R3 |
|
Recompte |
10 |
11 |
11 |
10 |
11 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
Moy. µg/L |
51 |
197 |
776 |
51 |
295 |
1196 |
42 |
228 |
1069 |
|
Écart type |
10,4 |
41,6 |
137,5 |
11,9 |
48,7 |
184,5 |
5,3 |
18,0 |
51,3 |
|
Recouvr.% |
101 % |
79 % |
78 % |
101 % |
118 % |
120 % |
85 % |
91 % |
107 % |
|
RSD% FI |
20,5 % |
21,1 % |
17,7 % |
23,5 % |
16,5 % |
15,4 % |
12,5 % |
7,9 % |
4,8 % |
|
HorRat |
0,82 |
1,08 |
1,12 |
0,94 |
0,84 |
0,97 |
0,50 |
0,40 |
0,30 |
Tableau 18. Tableau récapitulatif pour la fidélité intermédiaire
|
Composé |
Recouvrement |
RSD% |
HorRat |
|
Acésulfame |
89 %-111 % |
3,6 %-14,1 % |
0,18-0,72 |
|
Aspartame |
81 %-119 % |
4,4 %-18,1 % |
0,27-0,73 |
|
Cyclamate |
80 %-101 % |
2,7 %-13,3 % |
0,11-0,84 |
|
Saccharine |
78 %-117 % |
3,5 %-6,9 % |
0,18-0,28 |
|
Stévioside |
61 %-98 % |
7,6 %-26,4 % |
0,31-1,26 |
|
Sucralose |
78 %-120 % |
4,8 %-23,5 % |
0,30-1,12 |
13. Bibliographie
- DIRECTION GÉNÉRALE POUR LA SANTÉ ET LA SÉCURITÉ ALIMENTAIRE DE LA COMMISSION EUROPÉENNE, SANTE/11813/2017, « Analytical quality control and method validation procedures for pesticide residues and analysis in food and feed ». En vigueur à partir du 01/01/2018.
- Horwitz, W., et Albert, R., « The Horwitz Ratio (HorRat): A Useful Index of Method Performance with Respect to Precision », J AOAC Int, 89, 2006, p. 1095-1109.
- Code international des pratiques œnologiques, édition 2021, OIV, Paris.
- Règlement (CE) n° 1333/2008 du Parlement européen et du Conseil du 16 décembre 2008 sur les additifs alimentaires (Texte présentant de l’intérêt pour l’EEE), JO L 354 de 2008, p. 16-33.
Annexe
A1. Performance de quantification pour un échantillon de vin fortifié avec 50 µg/L de chaque édulcorant
|
Édulcorant |
S/B |
|
Acésulfame K |
789,4 |
|
Aspartame |
586,5 |
|
Cyclamate Na |
282,5 |
|
Saccharine |
24,3 |
|
Sucralose |
80,5 |
|
Stévioside |
224,1 |
A2. Données d’identification des édulcorants – autres transitions fournies à titre d’orientation
|
Édulcorant |
Autres transitions sous ESI en mode négatif |
|
Acésulfame K |
162 > 82 |
|
Aspartame |
293 > 200 |
|
Cyclamate Na |
178 > 96 |
|
Saccharine |
182 > 106 |
|
Sucralose |
397 > 361 |
|
Stévioside |
641 > 479 641 > 317 |